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频域式荧光寿命测量介绍

发布时间:2017-10-18

频域式荧光寿命测量介绍

最新数字频域式稳态/瞬态荧光光谱仪ChronosDFD

作者:Yevgen PovrozinEwald TerpetschnigISSInc

介绍

ChronosDFD是第一个数字式频域荧光寿命光谱仪器,可以使用激光二极管(LD)和发光二极管(LED)作为激发源来测量荧光时间分辨数据。此款功能强大的仪器不仅兼具荧光寿命光谱仪的寿命测量能力,同时极具性价比ChronosDFD使用Vinci(一种基于Windows的软件包)进行全自动化,可升级以进行稳态测量。

为了验证ChronosDFD多功能和灵活性,我们使用LEDLD光源测量了几种常见荧光化合物。ChronosDFD可以对这些化合物快速完成荧光测量及分析自动切换光源可以在几分钟内完成测量LEDLD提供优异的光源,具有大的调制深度——在某些频率下高达100%,它们可以轻松地调制到250 MHz(一些高达500 MHz)。参考ISS应用案例:使用280nm300nm LED的频域光谱。

所有测量均采用ISS的模块化寿命荧光计ChronosDFD进行。

1. ChronosDFD的示意图窗体底端

实验数据

2.使用370 nm LEDChronosDFD上获得的磷酸盐缓冲液pH 7.4中的水中ANSANS中的ANS-BSA的频率响应(相位和调制)。通过高通滤波器390收集发射信号。数据通过双指数衰减拟合:

ANS free

τ1= 0.250 ns,

τ2= 3.55 ns,

f1=0.87

ANS+BSA (2mg/mL)

τ1= 16.83 ns,

τ2= 3.02 ns,

f1=0.83

文献数据[1]BSA结合AND的两个组分:τ1= 16nsτ2 = 2-4nsDP = 1/1

3.该图显示了使用635nm LDChronosDFD上获得的叶绿素(从菠菜叶提取)的频率响应(相位和调制)通过高通滤波器660收集发射。通过619ps64%)和3.15ns36%)的双指数衰减时间最佳拟合数据,平均寿命为1.52ns

文献数据[2]:叶绿素平均寿命:1.2±0.5 ns

4.使用471nm LDChronosFD TM上获得的小牛胸腺DNA0.1mg / mL)存在下的溴化乙锭(EB)的频率响应曲线(相位和调制)。通过高通滤波器KV520收集发射。 对于EB-DNA复合物,数据最好通过两个衰变进行拟合21.86ns98%)和1.93ns2%),平均寿命为21.4ns溴化乙锭通过单指数拟合得到寿命值为1.68 ns

文献数据[3]:平均寿命(EBDNA结合):23 ns

文献数据[4]EB的寿命:1.7 ns(单指数)。

5.使用471nm LDChronosDFD上获得的水中[Rubpy3]Cl2Tris [2,2'-联吡啶]氯化钌(II))的频率响应曲线(相和调制)。 通过高通滤波器520KV收集发射。 数据通过377 ns(空气)的单指数衰减时间拟合。

文献数据[5]:寿命= 367ns(单指数,空气)

6.该图显示了使用473nm LDChronosDFD上获得的甲基四苯基卟啉在甲苯中的频率响应曲线(相位和调制)通过高通滤波器625KV收集发射。 数据通过单指数衰减时间拟合获得的寿命值为9.16 ns

文献数据[6]:甲苯中9.32ns(单指数)。

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